Protocol for identifying components of subcellular compartments by antibody-based in situ biotinylation

2025-08-02 最終更新日時 : 2025-08-02 鈴木秀文鈴木秀文

ご報告が遅くなりましたが、2025年5月にプロトコル論文がSTAR Protocols誌に掲載されました。https://nondomain.org/archives/2472で紹介させていただいた、抗体を用いたin situ空間ビオチン標識法のプロトコルを紹介しています。BioID法やAPEX法など、既存のin situ空間ビオチン標識法が存在しますが、本手法のメリットはなんといっても、内在性タンパク質を対象にできること、そして翻訳後修飾を対象にした解析ができるということです。本論文では紹介できていませんが、SILAC法と組み合わせることで、定量性の面でパフォーマンスが向上します。最近ではさらに改良された部分もあるので、ご興味のある方はお気軽にお問い合わせください。

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Summary: Recent studies revealed that membrane-less subcellular organelles play important roles in cellular functions. Here, we present a protocol for identifying subcellular compartment components by antibody-based in situ biotinylation. We describe steps for in situ biotinylation labeling using a horseradish peroxidase (HRP)-conjugated antibody, purification of the biotinylated components, and sample preparation for high-throughput analysis. This protocol has potential for application in the comprehensive analysis of dynamic subcellular organelles. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Noguchi et al. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2024.114734

Authors: Hidefumi Suzuki, Kexin Li, Sayaka Ito, Keiichiro Asano, Keisuke Noguchi, Ryota Abe, and Hidehisa Takahashi

DOI: https://doi.org/10.1016/j.xpro.2025.103803

Journal: STAR Protocols, 2025

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令和7年度（FY2025)、研究成果、鈴木 秀文
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2025-08-02